طراحی و ساخت وکتور بیانی اختصاصی کراتینوسیت های اپیدرمو بررسی بیان فاکتورIX انسانی به عنوان مدل

Authors

  • دکتر راضیه جلال,
  • دکتر فرزانه صابونی,
  • سید جواد حسینی,
Abstract:

  چکیده   سابقه و هدف   کراتینوسیت یک مدل مناسب برای بیان ژن به صورت ex vivo برای رهاسازی سیستمیک پروتئین است. با توجه به این نکته عناصر کنترلی اختصاصی کراتینوسیت‌ها، گزینه‌های مناسبی برای بیان ژن با واسطه کراتینوسیت‌ها هستند. در پژوهش حاضر یک وکتور برای بیان اختصاصی پروتئین‌های نوترکیب در کراتینوسیت‌های اپیدرم با استفاده از پروموتر ژن کراتین‌ـ‌ 14 انسانی طراحی گردید. توانایی پلاسمید ساخته‌شده به‌وسیله بیان cDNA فاکتور انعقادی IX انسان ی در کراتینوسیت‌های اولیه انسانی نشان داده‌شد.   مواد وروش ها   مطالعه انجام شده از نوع تجربی بود. با قرار گرفتن یک قطعه حاوی پروموتر ژن کراتین ـ 14 انسانی به جای پروموتر سیتومگالوویروس ( CMV ) در پلاسمید pcDNA3 ، پلاسمید بیانی phPK14H ساخته شد. در مرحله بعد cDNA فاکتور IX انسانی که از کتابخانه cDNA کبدی جدا شده بود، وارد پلاسمید بیانی شد و پلاسمید pK14hFIX ساخته شد و برای ترانسفکشن کراتینوسیت‌ها مورد استفاده قرار گرفت. کراتینوسیت‌های انسانی از پوست ختنه نوزادان جدا و با استفاده از محیط کشت عاری از سرم مخصوص کراتینوسیت‌ها کشت داده شدند. سلول‌های مزبور با پلاسمید نوترکیب جدید ساخته شده ( pK14hFIX ) با استفاده از فیوجین-6 ترانسفکت شدند. حدود 72 ساعت پس از ترانسفکشن، محیط کشت به‌دست آمده از سلول‌های ترانسفکت شده برای بررسی بیان فاکتور IX جمع آوری و سلول‌ها به محیط کشت انتخابی حاوی جنیتیسین منتقل شدند. ادامه کشت سلول‌های مزبور در محیط انتخابی منجر به پدیدار شدن 9 کلنی شد که در ادامه هر یک به صورت جداگانه کشت داده شده و مورد مطالعه قرار گرفتند. بیان cDNA فاکتور IX با استفاده از آزمون انعقادی یک مرحله‌ای بر روی محیط‌های کشت و هم‌چنین انجام RT-PCR بر روی سلول‌های کراتینوسیت ترانسفکت مورد مطالعه قرار گرفت.   یافته‌ها   زمان‌های انعقاد به دست آمده از محیط‌های کشت سری‌های مختلف ترانسفکشن با کنترل‌های منفی مقایسه شد. فعالیت انعقادی فاکتور IX نوترکیب در محیط کشت کراتینوسیت‌های ترانسفکت شده قبل از تیمار جنیتیسین وپس از انتخاب کلنی‌ها با جنیتیسین نشان داده شد. بیان cDNA فاکتور IX در سلول‌های ترانسفکت شده هم‌چنین با انجام RT-PCR تایید شد.   نتیجه‌گیری   نتایج اولیه ما نظریه‌ای که کراتینوسیت‌های انسانی قادر به تولید فاکتور IX فعال تحت کنترل پروموتر کراتین‌ـ14هستند را تایید می‌کند. علاوه بر این پلاسمید ساخته شده حاصل از این تحقیق ابزار مناسبی برای بررسی بیان پروتئین‌هایی که از اهمیت درمانی برخوردارند را در کراتینوسیت‌ها برای مطالعات مختلف بیوشیمیایی و سلولی فراهم ساخته است. کلمات کلیدی: فاکتور IX ، کراتینوسیت، کراتین ـ 14، ژن درمانی سوماتیک

Upgrade to premium to download articles

Sign up to access the full text

Already have an account?login

similar resources

طراحی و ساخت وکتور بیانی اختصاصی کراتینوسیت های اپیدرمو بررسی بیان فاکتورix انسانی به عنوان مدل

چکیده   سابقه و هدف   کراتینوسیت یک مدل مناسب برای بیان ژن به صورت ex vivo برای رهاسازی سیستمیک پروتئین است. با توجه به این نکته عناصر کنترلی اختصاصی کراتینوسیت ها، گزینه های مناسبی برای بیان ژن با واسطه کراتینوسیت ها هستند. در پژوهش حاضر یک وکتور برای بیان اختصاصی پروتئین های نوترکیب در کراتینوسیت های اپیدرم با استفاده از پروموتر ژن کراتین ـ 14 انسانی طراحی گردید. توانایی پلاسمید ساخته شده به ...

full text

طراحی، ساخت و بیان وکتور نوترکیب ژن نوکلئوپروتیین ویروس هاری

Background: Rabies is an acute encephalitis that causes more than 60,000 deaths worldwide. The only way to save individuals bitten by a rabies-infected animal is the timely use of effective vaccines. Treatment with new generation vaccines is expensive. Therefore, there is a global movement towards the production of less expensive vaccines which retain and improve upon the quality and effectiven...

full text

ساخت شاتل وکتور بیانی برای باکتری های اشریشیا کلی و باسیلوس سابتیلیس

سابقه و هدف: باسیلوس سابتیلیس به دلیل ویژگی های غیربیماری زا بودن و توانایی ترشح مقادیر بالای پروتئین، به عنوان یک میزبان خوب برای کلون سازی ژن و بیان پروتئین در نظر گرفته می شود. اما کارایی انتقال DNA پلاسمیدی اتصال یافته به درون سلول های باسیلوس سابتیلیس مستعد در مقایسه با سلول های اشریشیا کلی مستعد شده با کلرید کلسیم پایین می باشد. بنابراین بهتر است مراحل اولیه کلون سازی با استفاده از یک شات...

full text

ساخت شاتل وکتور بیانی برای باکتری های اشریشیا کلی و باسیلوس سابتیلیس

سابقه و هدف: باسیلوس سابتیلیس به دلیل ویژگی های غیربیماری زا بودن و توانایی ترشح مقادیر بالای پروتئین، به عنوان یک میزبان خوب برای کلون سازی ژن و بیان پروتئین در نظر گرفته می شود. اما کارایی انتقال DNA پلاسمیدی اتصال یافته به درون سلول های باسیلوس سابتیلیس مستعد در مقایسه با سلول های اشریشیا کلی مستعد شده با کلرید کلسیم پایین می باشد. بنابراین بهتر است مراحل اولیه کلون سازی با استفاده از یک شات...

full text

کلون سازی و بررسی بیان ژن ureB هلیکوباکتر پیلوری با استفاده از وکتور بیانی pcDNA3.1(+)

مقدمه: هلیکوباکتر پیلوری عامل بیماری هایی مانند گاستریت، زخم های گوارشی و سرطان غدد لنفاوی و دستگاه گوارشی است. هنوز واکسن موثری علیه هلیکوباکتر پیلوری تولید نشده است. آنزیم اوره آز یکی از عوامل مهم تحریک سیستم ایمنی میزبان است. بنابراین هدف این تحقیق کلون سازی و بررسی بیان ژن ureB به عنوان کاندیدای واکسن ژنی علیه هلیکوباکتر پیلوری می باشد. روش کار: در این بررسی تجربی، ژن کد کننده ی ureB از ژنو...

full text

طراحی، ساخت و بیان وکتور نوترکیب ژن نوکلئوپروتیین ویروس هاری

زمینه و هدف: هاری (rabies) یک آنسفالیت حاد است که سالانه سبب مرگ بیش از 60.000 انسان در جهان می شود. تنها راه نجات بیماران استفاده ی به موقع از واکسن های کارآمد است. هدف از این مطالعه معرفی یک سیستم بیانی یوکاریوتی جدید به منظور بیان ژن نوکلئوپروتیین (n) ویروس هاری می باشد. این سیستم جهت ارزیابی و ساخت واکسن ضد هاری به کار می رود. روش بررسی: توالی کامل ژن n سویه pv ویروس هاری به روش reverse tra...

full text

My Resources

Save resource for easier access later

Save to my library Already added to my library

{@ msg_add @}


Journal title

volume 3  issue 1

pages  17- 27

publication date 2006-03

By following a journal you will be notified via email when a new issue of this journal is published.

Keywords

No Keywords

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023